آماده سازی کشت های باکتریایی در لوله های کشت مایع یا روی سطح شیب دار آگار
هدف:
تلقیح محیط کشت یا باکتری مورد نظر بدون حضور میکروب های آلوده کننده. این مساله به عنوان تکنیک آسپتیک نامیده می شود.
مواد و وسایل :
- کشت مایعی از باکتری
لوله ی نوترین براث استریل
لوله ی نوترین آگارشیب داراستریل
پلیت نوترین آگار استریل
لوپ و سوزن تلقیح
روش کار:
آماده سازی میزکار
- فضای روی میزکار را با محلول ضدعفونی کننده (محلول5درصد آمفیل یا ترکیب آمونیوم یک چهارم تهیه شده براساس دستور کار شرکت سازنده)، ضدعفونی کنید. اجازه دهید تا سطح با هوا خشک شود. با دستمال کشیدن آن را خشک نکنید.
- لوازم را با رعایت ایمنی و محل مناسب بر روی میز بچینید. چراغ گاز را با رعایت حداقل احتمال سوختن لباس یا مو، در مکان مناسب قرار دهید. جای لوله آزمایش را در مقابل شعله، روی میز کار قرار دهید. کتاب و کاغذ را دور از محل کار نگه دارید.
انتقال باکتری از کشت مایع به لوله ی محیط کشت مایع
- نام ارگانیسم، تاریخ و نام خودتان را روی لوله ی محیط کشت مایع استریل بنویسید.
- با تکان دادن آهسته ی لوله، باکتری های لوله کشت مایع را مخلوط کنید. لوله ها را به کمک درپوش آن نگه ندارید، زیرا ممکن است درپوش آن رها شود.
- لوپ را همانند یک مداد نگه دارید. لوپ را با شعله پاشیدن سرتاسر قسمت سیمی آن تا زمانی که سرخ شود، استریل کنید. اجازه دهید لوپ خنک شود، اما به هیچ چیز تماس پیدا نکند.
- لوله کشت را در دست دیگرتان نگه دارید. با انگشت کوچک دستی که لوپ تلقیح را گرفته، در لوله نگه دارید و با چرخاندن لوله به کمک دست دیگر، آن را جدا کنید. در لوله را بر زمین نگذارید.
- به سرعت دهانه ی لوله را سه بار ازمیان شعله عبور دهید. لوله را با زاویه ی 45 درجه کنار شعله نگه دارید تا شانس افتادن ذرات گرد و غبار داخل لوله ی درباز، به حداقل برسد.
- لوپ خنک شده را به داخل کشت مایع فرو ببرید و مقدار کمی از کشت باکتری را که داخل لوپ جا گرفته خارج سازید.
- دهانه ی لوله را از میان شعله عبور دهید. درلوله ی کشت را گذاشته و آن را جای در جای لوله آزمایش قرار دهید. مراقب باشید که قطره ی کشت باکتری روی لوپ را از دست ندهید.
- لوله ی حاوی محیط کشت مایع و استریل را بگیرید و همانطوری که برای لوله ی قبل انجام دادید، در لوله را جدا کنید و دهانه ی لوله ی بدون در را از میان شعله عبور دهید.
- لوپ حاوی باکتری را داخل محیط کشت مایع تازه، وارد کنید و دسته ی لوپ را میان انگشتان تان بچرخانید تا باکتری ها از آن خارج شوند.
- دهانه ی لوله ی محیط کشت مایع را از میان شعله عبور دهید. در لوله ی آزمایش را بگذارید و آن را در جای لوله آزمایش قرار دهید.
- لوپ و سیم آن را شعله بپاشید تا سرخ شود. آن را روی میز بگذارید تا خنک شود.
- لوله ای که اخیرا تلقیح شد را در گرمخانه قرار دهید.
برای دریافت آخرین و به روزترین اطلاعات در زمینه :
می توانید از طریق لینک های ذکر شده میکروآزمون اقدام نمایید.
